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令人纠结的PCR,求高手指点

2016-11-28技术资料

令人纠结的PCR,求高手指点

今天PCR,目标条带1500bp左右,模板是cDNA,68度延伸1min40s,结果出来了2000-3000bp(据marker)的条带,这如何是好?
注:cDNA P其他基因没有问题

给出的信息还不够详细啦~目标片段不对,有可能是引物设计不对。最好能上图,这样大家才能更好地帮你解决问题。

 

请问你引物的TM值是多少?

 

注意调节退火温度,与引物的Tm值有关的

 

延伸温度好高啊,我们一般都不用这么高的

 
这延伸温度还高啊,一般延伸不都72度么
 

不好意思,搞错了,你的退火温度多少啊?用的什么酶?

 

我看大家P的目的片段长得时候才用68度延伸,你的也不是很长啊

 

估计是引物有问题,现在我也遇到了相同的问题,扩增1000bp的激发子片段,结果跑出2000多的片段,检查Tm,降低一下试试,跑个梯度确定一下温度。

 

核对下引物,会不会是引物出了问题呢!

 

跑marker只能粗略的估计大小,有时候也有差别,我觉得可以测一个序列鉴定一下序列,测一个样品,花不了多少钱。

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